Κυριακή 24 Ιανουαρίου 2021

ΠΑΝΙΚΟΣ ΑΠΟ ΤΙΣ ΑΠΟΚΑΛΥΨΕΙΣ ΤΟΥ ΙΑΤΡΟΥ κ. ΔΗΜΗΤΡΗ ΑΝΤΩΝΙΟΥ ΓΙΑ ΤΑ ΨΕΜΑΤΑ ΠΕΡΙ ΕΜΒΟΛΙΟΥ : ''Αποκαλύπτουμε πως τροποποιείται τεχνητά γενετικά ο κορονοιός ιός στο εμβόλιο όπως το περιγράφουν οι ίδιοι.''

ΔΙΑΒΑΣΤΕ ΟΛΑ ΟΣΑ ΕΚΘΕΤΕΙ ΛΕΠΤΟΜΕΡΩΣ ΚΑΙ ΜΕ ΣΤΟΙΧΕΙΑ ΑΔΙΑΣΕΙΣΤΑ ΣΤΟ BLOG ΤΟΥ  ''ZOIDOSIA.BLOGSPOT.GR''

ΚΑΙ ΑΚΟΥΣΤΕ ΤΟΝ ΙΔΙΟ ΚΑΙ ΣΤΗΝ ΕΚΠΟΜΠΗ ''ΠΑΡΕΜΒΑΣΕΙΣ'' ΤΟΥ METROPOLIS RADIO 95,5 FM

ΕΔΩ :

https://www.facebook.com/permalink.php?story_fbid=2612940178996827&id=1757155694575284



ΑΠΟΚΑΛΥΠΤΟΥΜΕ πως παρασκευάζεται το εμβόλιο με τεχνητή γενετική τροποποίηση

του γνησίου φυσικού ιού στο εργαστήριο, δια της τεχνολογίας recombinant technology. 

Τα εμβόλια αυτά που είναι "γενετικά τροποποιημένοι οργανισμοί" για να πάρουν άδεια κυκλοφορίας στην Ευρώπη από την Κομμσιόν μόνο, απαιτούν να έχουν γίνει πρώτα εκτεταμένες και πολύχρονες περιβαλλοντολογιές μελέτες για τους κινδύνους που προκύπτουν από την χρήση των για το περιβάλλον και τον άνθρωπο, σύμφωνα με το αρ.6 του Κανονισμού  726/2004 και τις Οδηγίας 2001/18/ΕΚ και 2001/83/ΕΚ.  Τέτοιες μελέτες δεν έχουν φυσικά γίνει και γι αυτό το εμβόλιο αυτό, όσο κι αν φαίνεται ΑΠΙΣΤΕΥΤΟ, ΔΕΝ ΕΧΕΙ ΑΔΕΙΑ ΚΥΚΛΦΟΡΙΑΣ ΚΑΙ ΧΡΗΣΗ, διότι τέτοια άδεια ΔΕΝ έχει δημοσιευτεί στην Εφημερίδα της ΕΕ (αντίστοιχο ΦΕΚ), όπως προβλέπεται στο αρ.13.2 Κανονισμού 726/2004.  

Κι όχι μόνο αυτό: Στην παρ. 2.3.4 (σελ.51) της έκθεσης της ΕΜΑ, αναφέρεται ότι περιβαλλοντολογική αξιολόγηση δεν απαιτείται!! « Ecotoxicity/environmental risk assessment As the active substance is a vaccine product (which additionally is based on naturally degradable mRNA and lipids), no ERA is considered necessary» (σελ.51)ενώ στην σελ.50 αναφέρεται ότι δεν έχει γίνει ούτε μελέτη για τις επιπτώσεις που έχει το εμβόλιο στα αναπαραγωγικά κύτταρα (ωάρια και σπερματοζωάρια): Genotoxicity No genotoxicity studies have been provided. This is acceptable as the components of the vaccine formulation are lipids and RNA that are not expected to have genotoxic potential (σελ.50).

Σας χρησιμοποιούν ως πειραματόζωο..

Δημ. Αντωνίου

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Η παρακάτω περιγραφή κατασκευής του εμβολίου, που περιγράφει την μέθοδο κατασκευής του και τα άλλα στοιχεία που προαναφέρω,  δημοσιεύεται στην επίσημη έκθεση της ΕΜΑ (Ευρωπαικός ιός)  ΑΛΛΑ δεν δημοσιεύεται στην Ελληνική του μετάφραση !

EMA ASSESSMENT

About the product BNT162b is a mRNA vaccine for prevention of COVID-19. The vaccine is made of a mRNA encoding for the full-length SARS-CoV-2 spike glycoprotein (S) encapsulated in lipid nanoparticles (LNPs). The sequence of the S protein was chosen based on the sequence for the “SARS-CoV-2 isolate Wuhan-Hu1”, which was available when the program was initiated: GenBank: MN908947.3 (complete genome) and GenBank: QHD43416.1 (spike surface glycoprotein). The active substance consists of a single-stranded, 5'-capped mRNA that is translated into a codonoptimized sequence encoding the spike antigen of SARS-CoV-2. The RNA contains common structural elements optimized for mediating high RNA stability and translational efficiency (see section 2.2). The LNPs protect the RNA from degradation by RNAses and enable transfection of host cells after intramuscular (IM) delivery. The mRNA is translated into the SARS-CoV-2 S protein in the host cell cytosol. The S protein is then expressed on the cell surface where it induces an adaptive immune response. The S protein is identified as a target for neutralising antibodies against the virus and is therefore considered a relevant vaccine component. The vaccine, BNT162b2 (30 µg), is administered intramuscularly (IM) in two 30 µg doses of the diluted vaccine solution given 21 days apart. Intended indication: ‘Active immunisation to prevent COVID-19 disease caused by SARS-CoV-2 virus, in individuals 16 years of age and older’ (σελ.13) 

Control of materials

An adequate overview of the raw materials and solutions used in the active substance manufacturing process is provided. Representative certificates of analysis have been provided. The submitted information supports the appropriate quality of raw materials. It is recommended that the applicant should implement relevant testing strategies to ensure an adequate microbiological control for the starting materials (REC1) and should implement a relevant testing strategy to ensure that HEPES (Pfizer) raw material, included in the formulation buffer of FP, is free from contaminating RNases (REC2). The description of synthesis of 5’cap and its related impurities were requested during the procedure. Appropriate information was given. The applicant should implement in-house functional activity analytical methods for release testing of enzymes used in the manufacturing process at all relevant manufacturing sites, by Q1 2021 (REC3). The BNT162b2 active substance is manufactured by in vitro transcription using a linear DNA template, produced via plasmid DNA from transformed Escherichia coli cells. The linear DNA template is not part of the final product but defines the sequence of the mRNA product and therefore it is fundamental to ensure the adequate control of the active substance. Changes to the manufacturing process of the linear DNA template (e.g. change to plasmid host cell) may result in a different impurity profile in the active substance. Additional details on the manufacturing process and the control strategy for this starting material, initially only shortly described, have been provided and the dossier will be updated accordingly. The cell banks involved in the plasmid manufacturing process are described. Master cell bank (MCB) and working cell bank (WCB) qualification tests are listed. Relevant specifications are set and data from the current MCB and WCB are provided. The plasmid MCBs and WCBs are enrolled in a cell bank stability program. The strategy is considered adequate, noting that the dossier will be updated as appropriate. A protocol for establishment of future WCBs is provided. Following fermentation, the cells are harvested and chemically lysed to recover the plasmid DNA. After this lysis step, the circular plasmid DNA is purified. The circular plasmid DNA is filtered and stored frozen. The strategy for establishing the initial shelf-life is endorsed and data provided support the proposed shelf life. A list of the raw materials as well as other materials used in the manufacture of the Assessment report EMA/707383/2020 Page 17/140 linear DNA template is provided. All materials used are animal origin free and sourced from approved suppliers. Specifications for the circular plasmid DNA as well as for the DNA linear template are provided. Process- and product-related impurities including host cell genomic DNA, RNA, proteins, endotoxins, bioburden and plasmid isoforms, for the plasmid DNA, are routinely quantified. The reference material is described. Implementation of any changes in the manufacture of the linear DNA template should be applied for in a variation application. (ΣΕΛ.15-17)

Active substanceOverall, the information provided is satisfactory. However, certain information is still pending due to the very short time frame of product development and will either be updated in the dossier imminently or further addressed in specific obligations and other post-approval measures. Information on the manufacturing process and process controls for the manufacturing sites Andover and BNT Mainz & Rentschler have been provided and are considered satisfactory. Two active substance processes have been used during the development; Process 1 and 2. The major changes between AS Process 1 and 2 are: increased process scale, DNA template changed from a PCR template to linearised plasmid DNA, magnetic bead purification replaced with proteinase K digestion and UFDF steps. Based on the differences observed between batches manufactured by active substance Process 1 and 2 for the CQA mRNA integrity and lack of characterisation data, a MO was raised regarding comparability, characterisation and clinical qualification of the one proposed acceptance criteria. Biological characterisation of the active substance was limited, and additional data and discussion were requested to address functionality. Additional characterisation data for the active substance are to be provided to confirm the identities of the observed Western Blot (WB) bands obtained by the in vitro expression assay (SO1). Truncated RNA species are regarded as product-related impurities and can be expected due to the principle of the in-vitro transcription reaction (i.e. directional polymerase activity) and (theoretical) hydrolysis during manufacturing. Analysis of RNase treated samples showed that all species detected Assessment report EMA/707383/2020 Page 33/140 by the capillary gel electrophoresis (CGE)-based method are composed of RNA. Manufacturing consistency with respect to fragmented species has been sufficiently demonstrated. There were some differences in truncated RNA species level, however further analyses revealed a comparable overall fragmentation profile among Process 1 and Process 2 active substance batches. Additionally, oligonucleotide mapping data demonstrated no significant differences observed between Process 1 and Process 2 active substance batches. The company does not expect truncated transcripts formulated in the finished product to pose a safety or efficacy concern, as in their view no protein expression is expected from truncated transcripts. Further, clinical trials with process 1 material have not revealed major safety concerns to date. Truncated BNT162b2 RNA species lacking either the 5’ cap or the poly(A) tail are expected to be rapidly targeted for degradation in the cytoplasm or would show a decrease or loss of translation efficiency. Preliminary characterization data on isolated fragment species suggest that fragment species predominantly include the 5’-cap but lack the poly(A) tail, supporting the hypothesis that most fragments would arise from premature termination in the IVT reaction. However, as the overall characterisation of the truncated species is still limited, additional analysis of truncated species, additional translated protein characterisation, additional characterisation of lipidrelated impurities and potential lipid-RNA species should be provided to support that they are not impacting clinical performance in terms of safety and/or efficacy. The current specification allows for a certain level of truncated mRNA species to be present however data from recent batches have shown levels of truncated species below that level. No related safety issues have been identified in the clinical studies thus far in subjects who received vaccine containing up to a certain level of truncated species. Therefore, the current specification is considered acceptable subject to the submission of additional data in the frame of a specific obligation (SO1). Based on available data, the proposed specification for active substance is acceptable with respect to the attributes chosen for routine release testing. However, the length of the poly(A) tails in BNT162b2 active substance is critical for RNA stability and translational efficiency and therefore should be introduced in active substance release testing in the frame of a specific obligation (SO2). Moreover, the active substance specification acceptance limits should be re-assessed and revised as appropriate, as further data become available from ongoing clinical trials and in line with manufacturing process capability (SO2). It is noted that the Applicant states that testing is currently in progress on the clinical batches and data for these batches, as well as any new data available for the primary process validation batches, will be provided. Based on the limited stability data presented, a shelf-life is approved for the active substance. Finished product The finished product is a preservative-free, multi-dose concentrate to be diluted for intramuscular injection, intended for 5 doses. The finished product is a sterile dispersion of RNA-containing lipid nanoparticles (LNPs) in aqueous cryoprotectant buffer. The formulation development studies of the RNA containing lipid nanoparticles have been thoroughly described including studies that were performed with available active substance, representative of the mRNA platform and included in the finished product. The development of the manufacturing process is extensively described, and critical process parameters are defined. The manufacturing process includes lipid nanoparticle fabrication and bulk finished product formulation followed by fill and finish, and the process has been acceptably described. Assessment report EMA/707383/2020 Page 34/140 Comparability between the commercial finished product and the clinical finished product has been sufficiently demonstrated for the attributes tested and will be subject to a specific obligation. Limited data on the finished product batches manufactured at the commercial facility (entire manufacturing process at the commercial site Pfizer, Puurs, at commercial scale, active substance from process 2) were presented. A process validation plan for PPQ lots has been provided. A concurrent validation approach will be used due to the urgent need for this product and the pandemic situation. The rationale for this approach has been documented. This concurrent approach requires interim reports to be documented for each individual validation run. An overall report per site will be compiled that summarises all evaluations and contains a comparability assessment of the data of all batches manufactured. Finally, a concluding report linked to this plan will be written that summarises all findings from the different validation reports. Further data was requested in order to conclude on the consistency of finished product manufacturing, to assure comparability between the commercial product with the product used in clinical trials, and to support the claimed finished product shelf-life and storage conditions. A process validation plan for PPQ lots has been provided. Process validation (PPQ) for commercial scale batches were initiated, and a summary report from one PPQ validation batch was provided. In summary, given that an acceptable validation program, also comprising the commercial facility at Puurs, Belgium, has been established, and a summary report from one PPQ validation batch was provided, the information on process validation is considered acceptable subject to the agreed specific obligation that the MAH should provide additional validation data (SO3). The specifications for finished product include a comprehensive panel of relevant tests along with corresponding acceptance criteria. Several issues in relation to the acceptance criteria in the finished product specifications were raised, i.e. the LNP size, polydispersity, RNA encapsulation, in-vitro expression and RNA integrity. Whilst FP specifications were subsequently amended and overall found to be acceptable, the acceptance limits should be re-assessed, and revised as appropriate, as further data becomes available from ongoing clinical trials and in line with manufacturing process capability (SO2). Two novel excipients are included in the LNP. Complete information is not provided for both the cationic lipid ALC-0315 and the PEGylated lipid ALC-0159. In order to assure comprehensive control throughout the lifecycle of the finished product and to ensure batch to batch consistency, further information needs to be submitted regarding the synthetic process and control strategy in line with specific obligations (SO4, SO5). Lipid-related impurities have been observed in some recently manufactured finished product batches. For the batches with lipid-related impurities the existing quality control parameters including RNA integrity remain unchanged. Considering the above and the emergency situation, the characterisation of the active substance and finished product is considered acceptable, and the proposed specifications for RNA Integrity and 5’-Cap are considered to be scientifically justified and acceptable. Nevertheless, additional data to complete the characterisation of the active substance and finished product and additional clinical data from batches currently in use in ongoing clinical studies, are considered important to confirm the clinical qualification of these specifications. These data are requested to be provided as specific obligations to the applied conditional marketing authorisation (SO1, SO2). Efficacy, safety and immunogenicity was demonstrated using clinical batches of vaccine from Process 1. The commercial batches are produced using a different process (Process 2), and the comparability of these processes relies on demonstration of comparable biological, chemical and physical characteristics of the active substance and finished product. Assessment report EMA/707383/2020 Page 35/140 The characterisation and control of active substance and finished product are limited in relation to critical quality attributes and impurities. The suitability of the analytical methods used for control of potency and poly(A) tail have not been fully demonstrated. Data demonstrate the presence of significant amounts of truncated/modified forms of mRNA at somewhat higher levels in the batches manufactured with the commercial process as compared to material used in clinical trials. These forms are poorly characterised, and the limited data provided for protein expression do not fully address the uncertainties relating to the risk of translating proteins/peptides other than the intended spike protein. The control strategy for active substance and finished product is important to guarantee acceptable quality and ensure batch to batch consistency of the finished product. Regarding the proposed control strategy, questions were raised both with regard to the suitability of the test methods used and the acceptance criteria for some tests. Based on the above, the following uncertainties are considered to be of importance for the benefit-risk assessment: • Truncated and modified RNA are present as impurities. Considering the low dose of mRNA (30 µg), the impurities are not considered a safety issue based on general toxicological principles. However, when present in the cell there is a possibility that aberrant proteins will be expressed with possibilities for unwanted immunological events. The risk of this occurring is considered low based on the following observations and considerations: o Such impurities were present in the vaccine used in the Phase 3 clinical trials with an acceptable safety profile. Although the lack of characterisation hinders a full comparability evaluation there is no indication that there would be important qualitative differences in the nature of these impurities. o The high levels of these impurities reflect the instability of RNA resulting in generation of RNA fragments both in the transcription step and thereafter. Based on electrophoretic data it appears that there is a diverse set of fragments. Although not confirmed, it is unlikely that these RNA molecules to a large extent would be mRNA molecules with intact 5’-cap and 3’-polyA. o The level of any individual aberrant mRNA species would in any way be magnitudes lower than the level of the intact mRNA and this would be mirrored by the level of protein expression. The amount of the protein would be expected to be too low to elicit an immune response. The spike protein is a highly immunogenic protein and immunodominance would also ascertain that the immune response to the aberrant protein would be non-significant. • Lipid related impurities were observed in recently produced finished product batches. Based on the low dose (30 µg mRNA) it is considered that the amounts of these impurities are too low to be of toxicological significance. (σελ.32-37)

Mechanism of actionSARS-CoV-2 infects the body by the use of the Spike protein (S) to attach to specific cell surface receptors, of which the angiotensin converting enzyme 2 (ACE2) may constitute a major part, as recently suggested. In addition to the initial attachment to a host cell, the S protein is also responsible for viral envelope fusion with the host cell membrane resulting in genome release. Due to its indispensable role, the S protein is a major target of virus neutralizing antibodies and has become a key antigen for vaccine development. By immunisation with the modified RNA (modRNA) product BNT162b2, encoding for the S protein, the intention is to trigger a strong and relatively long-lasting production of high affinity virus neutralizing antibodies, which can act through blocking the S-protein and it’s receptor-binding domain (RBD) interaction with host cell receptors but also by opsonisation mediated virus clearance. In addition, the immunisation with BNT162b2 is also intended to elicit a concomitant T cell response of the Th1 type, supporting the B cells responsible for the production of Sspecific antibodies and cytotoxic T cells that kill virus infected cells. Assessment report EMA/707383/2020 Page 42/140 The S protein is a trimeric class I fusion protein that exists in a metastable prefusion conformation before engaging with a target cell. BNT162b2 encodes a P2 mutant (P2 S) variant of S where two consecutive proline mutations have been introduced in order to lock the RBD in the prefusion conformation. In addition, BNT162b2 is nucleoside-modified by a substitution of 1-methylpseudouridine for uridine and thus its inherent adjuvant activity mediated by binding to innate immune sensors such as toll-like receptors (TLRs) 7 and 8, is dampened, but not abrogated. Furthermore, the structural elements of the vector backbones of the BNT162b2 are optimised for prolonged and strong translation of the antigen-encoding RNA. The potency of the RNA vaccine is further optimised by encapsulation of the RNA into lipid nano particles (LNPs), which protects the RNA from degradation by RNAses and enable transfection of host cells after intramuscular (i.m.) delivery. The functional and ionizable lipid, ALC-0315, is identified as the primary driver of delivery as it allows the LNPs to have a neutral charge in a physiological environment to facilitate internalization; the endosomal environment exhibits a positive charge and therefore triggers the translocation of RNA into the cytosol (Midoux & Pichon, 2015; Hassett et al, 2019; Patel et al, 2019); ALC-0159 is included in the formulation to provide a steric barrier to: 1) facilitate the control of particle size and homogeneity during manufacturing and product storage, and 2) regulate the association of plasma and proteins with the LNP surface. The composition of the LNPs may also affect the distribution of injected BNT162b2. In addition, it cannot be excluded the LNP composition contributes to the overall immunogenicity. Administration of LNP-formulated RNA vaccines IM results in transient local inflammation that drives recruitment of neutrophils and antigen presenting cells (APCs) to the site of delivery. Recruited APCs are capable of LNP uptake and protein expression and can subsequently migrate to the local draining lymph nodes where T cell priming occurs. In general, following endocytosis of LNPs, the mRNA is released from the endosome into the host cell cytosol (Sahay et al, 2010; Maruggi et al, 2019). The process of an RNA vaccine-elicited immune response has been demonstrated in both murine and nonhuman primate models (Pardi et al, 2015; Liang et al, 2017) (σελ.41-42)

GenotoxicityNo genotoxicity studies have been provided. This is acceptable as the components of the vaccine formulation are lipids and RNA that are not expected to have genotoxic potential (σελ.50)

 2.3.4. Ecotoxicity/environmental risk assessmentAs the active substance is a vaccine product (which additionally is based on naturally degradable mRNA and lipids), no ERA is considered necessary (σελ.51)

https://www.ema.europa.eu/en/documents/assessment-report/comirnaty-epar-public-assessment-report_en.pdf


ΜΕΤΑΦΡΑΣΗ ΑΠΟ ΤΟ GOOGLE :


Σχετικά με το προϊόν Το BNT162b είναι ένα εμβόλιο mRNA για την πρόληψη του COVID-19. 

Το εμβόλιο είναι κατασκευασμένο από mRNA που κωδικοποιεί την πλήρους μήκους SARS-CoV-2 ακίδα

γλυκοπρωτεΐνη (S) ενθυλακωμένη σε λιπιδικά νανοσωματίδια (LNPs). 

Η αλληλουχία της πρωτεΐνης S επιλέχθηκε με βάση την ακολουθία για το "απομονωμένο WSS-CoV-2

Wuhan-Hu1", το οποίο ήταν διαθέσιμο όταν ξεκίνησε το πρόγραμμα:

GenBank: MN908947.3 (πλήρες γονιδίωμα) και GenBank: QHD43416.1  (επιφανειακή γλυκοπρωτεΐνη).

  Η δραστική ουσία αποτελείται από ένα μονόκλωνο, 5'-καλυμμένο mRNA που μεταφράζεται

σε μια βελτιστοποιημένη με κωδικοποιητική αλληλουχία κωδικοποίηση του ακίδου αντιγόνου

του SARS-CoV-2. 

Το RNA περιέχει κοινά δομικά στοιχεία βελτιστοποιημένα για τη μεσολάβηση υψηλής σταθερότητας RNA

και αποδοτικότητας μετάφρασης (βλ. Ενότητα 2.2). 

Τα LNPs προστατεύουν το RNA από την αποικοδόμηση με RNAses

και επιτρέπουν την επιμόλυνση των κυττάρων ξενιστών μετά την ενδομυϊκή χορήγηση. 

Το mRNA μεταφράζεται στην πρωτεΐνη SARS-CoV-2S στο κυτταρικό κύτταρο ξενιστή. 

Η πρωτεΐνη S στη συνέχεια εκφράζεται στην κυτταρική επιφάνεια

όπου προκαλεί προσαρμοστική ανοσοαπόκριση. 

Η πρωτεΐνη S αναγνωρίζεται ως στόχος εξουδετέρωσης αντισωμάτων κατά του ιού

και επομένως θεωρείται ένα σχετικό συστατικό εμβολίου. 

Το εμβόλιο, BNT162b2 (30 μg), χορηγείται ενδομυϊκά (IM) σε δύο δόσεις των 30 μg

του αραιωμένου διαλύματος εμβολίου που δίδονται 21 ημέρες. 

Προβλεπόμενη ένδειξη: «Ενεργός ανοσοποίηση για την πρόληψη της νόσου COVID-19

που προκαλείται από τον ιό SARS-CoV-2, σε άτομα ηλικίας 16 ετών και άνω» (σελ.13)


 Έλεγχος υλικών


 Παρέχεται επαρκής επισκόπηση των πρώτων υλών και των διαλυμάτων που χρησιμοποιούνται

στη διαδικασία παρασκευής της δραστικής ουσίας.  Παρέχονται αντιπροσωπευτικά πιστοποιητικά

ανάλυσης.  Οι πληροφορίες που υποβάλλονται υποστηρίζουν την κατάλληλη ποιότητα των

πρώτων υλών.  Συνιστάται ο αιτών να εφαρμόσει σχετικές στρατηγικές δοκιμών για να εξασφαλίσει

επαρκή μικροβιολογικό έλεγχο για τα αρχικά υλικά (REC1) και να εφαρμόσει σχετική στρατηγική

δοκιμών για να διασφαλίσει ότι η πρώτη ύλη HEPES (Pfizer), που περιλαμβάνεται

στο ρυθμιστικό διάλυμα FP, είναι  απαλλαγμένο από μολυσματικές RNases (REC2). 

Η περιγραφή της σύνθεσης του 5'cap και των σχετικών ακαθαρσιών του ζητήθηκε κατά τη διάρκεια

της διαδικασίας.  Δόθηκαν οι κατάλληλες πληροφορίες. 

Ο αιτών θα πρέπει να εφαρμόσει εσωτερικές αναλυτικές μεθόδους λειτουργικής δραστηριότητας

για τη δοκιμή απελευθέρωσης ενζύμων που χρησιμοποιούνται στη διαδικασία παραγωγής

σε όλες τις σχετικές τοποθεσίες παραγωγής, έως το Q1 2021 (REC3). 

Η δραστική ουσία BNT162b2 παρασκευάζεται με μεταγραφή in vitro χρησιμοποιώντας γραμμικό

πρότυπο DNA, που παράγεται μέσω πλασμιδιακού DNA από μετασχηματισμένα κύτταρα

Escherichia coli. 

Το γραμμικό πρότυπο DNA δεν αποτελεί μέρος του τελικού προϊόντος αλλά ορίζει την αλληλουχία

του προϊόντος mRNA και επομένως είναι θεμελιώδες να διασφαλίζεται ο επαρκής έλεγχος

της δραστικής ουσίας.  Αλλαγές στη διαδικασία παρασκευής του γραμμικού προτύπου DNA

(π.χ. αλλαγή σε κύτταρο ξενιστή πλασμιδίου) μπορεί να οδηγήσουν σε διαφορετικό προφίλ

προσμείξεων στη δραστική ουσία.  Πρόσθετες λεπτομέρειες σχετικά με τη διαδικασία κατασκευής

και τη στρατηγική ελέγχου για αυτό το αρχικό υλικό, αρχικά μόλις περιγράφηκε σύντομα,

έχουν παρασχεθεί και ο φάκελος θα ενημερωθεί αναλόγως. 

Περιγράφονται οι τράπεζες κυττάρων που εμπλέκονται στη διαδικασία κατασκευής πλασμιδίων. 

Παρατίθενται τα τεστ πιστοποίησης Master Cell Bank (MCB) και τράπεζας κυττάρων εργασίας (WCB). 

Ορίζονται σχετικές προδιαγραφές και παρέχονται δεδομένα από τα τρέχοντα MCB και WCB. 

Τα πλασμίδια MCBs και WCBs εγγράφονται σε ένα πρόγραμμα σταθερότητας τράπεζας κυττάρων.  Η στρατηγική θεωρείται επαρκής, σημειώνοντας ότι ο φάκελος θα ενημερωθεί ανάλογα.  Παρέχεται ένα πρωτόκολλο για τη δημιουργία μελλοντικών WCBs.  Μετά τη ζύμωση, τα κύτταρα συλλέγονται και υποβάλλονται σε χημική λύση για ανάκτηση του πλασμιδικού DNA.  Μετά από αυτό το στάδιο λύσης, το κυκλικό πλασμιδικό DNA καθαρίζεται.  Το κυκλικό πλασμιδικό DNA διηθείται και αποθηκεύεται κατεψυγμένο.  Υποστηρίζεται η στρατηγική για τον καθορισμό της αρχικής διάρκειας ζωής και τα δεδομένα που παρέχονται υποστηρίζουν την προτεινόμενη διάρκεια ζωής.  Παρέχεται μια λίστα με τις πρώτες ύλες καθώς και άλλα υλικά που χρησιμοποιούνται για την κατασκευή της έκθεσης αξιολόγησης EMA / 707383/2020 Page 17/140 γραμμικό πρότυπο DNA.  Όλα τα υλικά που χρησιμοποιούνται είναι ζωικής προέλευσης και προέρχονται από εγκεκριμένους προμηθευτές.  Παρέχονται προδιαγραφές για το κυκλικό πλασμίδιο DNA καθώς και για το γραμμικό πρότυπο DNA.  Οι ακαθαρσίες που σχετίζονται με τη διαδικασία και το προϊόν, συμπεριλαμβανομένων των γονιδιωματικών DNA κυττάρων-ξενιστών, RNA, πρωτεϊνών, ενδοτοξινών, βιοφόρτωσης και ισομορφών πλασμιδίου, για το πλασμιδικό DNA, ποσοτικοποιούνται συνήθως.  Περιγράφεται το υλικό αναφοράς.  Η εφαρμογή οποιωνδήποτε αλλαγών στην κατασκευή του γραμμικού προτύπου DNA πρέπει να ζητηθεί σε μια εφαρμογή παραλλαγής.  (ΣΕΛ.15-17)


 Δραστική ουσία

Συνολικά, οι παρεχόμενες πληροφορίες είναι ικανοποιητικές. 

Ωστόσο, ορισμένες πληροφορίες εκκρεμούν ακόμη λόγω του πολύ μικρού χρονικού πλαισίου

ανάπτυξης προϊόντων και είτε θα ενημερωθούν αμέσως στον φάκελο είτε θα εξεταστούν περαιτέρω

σε συγκεκριμένες υποχρεώσεις και άλλα μέτρα μετά την έγκριση. 

Παρέχονται πληροφορίες σχετικά με τη διαδικασία κατασκευής και τους ελέγχους διεργασιών

για τις εγκαταστάσεις παραγωγής Andover και BNT Mainz & Rentschler και θεωρούνται ικανοποιητικές.

  Κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης χρησιμοποιήθηκαν δύο διεργασίες δραστικής ουσίας. 

Διαδικασία 1 και 2.

Οι κύριες αλλαγές μεταξύ της διαδικασίας AS 1 και 2 είναι:

αυξημένη κλίμακα διαδικασίας,

πρότυπο DNA άλλαξε από πρότυπο PCR σε γραμμικοποιημένο πλασμίδιο DNA,

καθαρισμός μαγνητικών σφαιριδίων που αντικαταστάθηκε με πέψη πρωτεϊνάσης Κ και βήματα UFDF. 

Με βάση τις διαφορές που παρατηρήθηκαν μεταξύ παρτίδων που παρασκευάστηκαν

από τη δραστική ουσία Διαδικασία 1 και 2 για την ακεραιότητα του mRNA CQA

και την έλλειψη δεδομένων χαρακτηρισμού, δημιουργήθηκε ένα MO σχετικά με τη συγκρισιμότητα,

τον χαρακτηρισμό και την κλινική πιστοποίηση των προτεινόμενων κριτηρίων αποδοχής. 

Ο βιολογικός χαρακτηρισμός της δραστικής ουσίας ήταν περιορισμένος

και ζητήθηκαν πρόσθετα δεδομένα και συζήτηση για την αντιμετώπιση της λειτουργικότητας. 

Πρόσθετα δεδομένα χαρακτηρισμού για τη δραστική ουσία πρέπει να παρέχονται για να επιβεβαιώσουν τις ταυτότητες των παρατηρούμενων ζωνών Western Blot (WB) που λαμβάνονται με τον προσδιορισμό έκφρασης in vitro (SO1).  Τα περικομμένα είδη RNA θεωρούνται ως ακαθαρσίες που σχετίζονται με το προϊόν και μπορούν να αναμένονται λόγω της αρχής της in-vitro αντίδρασης μεταγραφής (δηλ. Δραστικής κατευθυνόμενης πολυμεράσης) και (θεωρητικής) υδρόλυσης κατά την κατασκευή.  Η ανάλυση των δειγμάτων που υποβλήθηκαν σε αγωγή με RNase έδειξε ότι όλα τα είδη που ανιχνεύθηκαν Αναφορά αξιολόγησης EMA / 707383/2020 Page 33/140 με τη μέθοδο της ηλεκτροφόρησης τριχοειδούς πηκτής (CGE) αποτελούνται από RNA.  Η κατασκευαστική συνέπεια σε σχέση με τα κατακερματισμένα είδη έχει αποδειχθεί επαρκώς.  Υπήρξαν κάποιες διαφορές στο επίπεδο των περικομμένων ειδών RNA, ωστόσο περαιτέρω αναλύσεις αποκάλυψαν ένα συγκρίσιμο προφίλ συνολικού κατακερματισμού μεταξύ των παρτίδων της δραστικής ουσίας της διαδικασίας 1 και της διεργασίας 2.  Επιπλέον, τα δεδομένα χαρτογράφησης ολιγονουκλεοτιδίων δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές που παρατηρήθηκαν μεταξύ των παρτίδων της δραστικής ουσίας της Διαδικασίας 1 και της Διαδικασίας 2.  Η εταιρεία δεν αναμένει περικομμένα αντίγραφα που έχουν διατυπωθεί στο τελικό προϊόν να αποτελούν ανησυχία για την ασφάλεια ή την αποτελεσματικότητα, καθώς κατά την άποψή τους δεν αναμένεται έκφραση πρωτεΐνης από κομμένα αντίγραφα.  Επιπλέον, οι κλινικές δοκιμές με υλικό της διαδικασίας 1 δεν έχουν αποκαλύψει σημαντικές ανησυχίες για την ασφάλεια μέχρι σήμερα.  Περικομμένα είδη RNA BNT162b2 που δεν έχουν είτε το καπάκι 5 'είτε την ουρά πολυ (Α) αναμένεται να στοχεύονται ταχέως για αποικοδόμηση στο κυτταρόπλασμα ή θα εμφανίζουν μείωση ή απώλεια αποτελεσματικότητας μετάφρασης.  Τα προκαταρκτικά δεδομένα χαρακτηρισμού για απομονωμένα είδη θραυσμάτων υποδηλώνουν ότι τα είδη θραυσμάτων περιλαμβάνουν κυρίως το καπάκι 5'αλλά δεν έχουν την ουρά πολυ (Α), υποστηρίζοντας την υπόθεση ότι τα περισσότερα θραύσματα θα προέκυπταν από τον πρόωρο τερματισμό στην αντίδραση IVT.  Ωστόσο, καθώς ο συνολικός χαρακτηρισμός του περικομμένου είδους είναι ακόμη περιορισμένος, θα πρέπει να παρέχεται πρόσθετη ανάλυση κολοβωμένων ειδών, πρόσθετος μεταφρασμένος χαρακτηρισμός πρωτεΐνης, επιπρόσθετος χαρακτηρισμός λιπιδικών προσμίξεων και πιθανά είδη λιπιδίων-RNA για να υποστηρίξουν ότι δεν επηρεάζουν την κλινική απόδοση από άποψη  ασφάλειας και / ή αποτελεσματικότητας.  Η τρέχουσα προδιαγραφή επιτρέπει την παρουσία ενός συγκεκριμένου επιπέδου κομμένων ειδών mRNA, ωστόσο δεδομένα από πρόσφατες παρτίδες έχουν δείξει επίπεδα κομμένων ειδών κάτω από αυτό το επίπεδο.  Δεν έχουν εντοπιστεί σχετικά ζητήματα ασφάλειας στις κλινικές μελέτες μέχρι στιγμής σε άτομα που έλαβαν εμβόλιο που περιείχε έως ένα συγκεκριμένο επίπεδο κομμένων ειδών.  Επομένως, η τρέχουσα προδιαγραφή θεωρείται αποδεκτή υπό την προϋπόθεση της υποβολής πρόσθετων δεδομένων στο πλαίσιο μιας συγκεκριμένης υποχρέωσης (SO1).  Με βάση τα διαθέσιμα δεδομένα, η προτεινόμενη προδιαγραφή για τη δραστική ουσία είναι αποδεκτή σε σχέση με τα χαρακτηριστικά που επιλέγονται για δοκιμή ρουτίνας απελευθέρωσης.  Ωστόσο, το μήκος των ουρών πολυ (Α) στη δραστική ουσία BNT162b2 είναι ζωτικής σημασίας για τη σταθερότητα του RNA και την αποδοτικότητα της μετάφρασης και επομένως θα πρέπει να εισαχθεί σε δοκιμές απελευθέρωσης δραστικής ουσίας στο πλαίσιο μιας συγκεκριμένης υποχρέωσης (SO2).  Επιπλέον, τα όρια αποδοχής των προδιαγραφών της δραστικής ουσίας θα πρέπει να επανεκτιμηθούν και να αναθεωρηθούν, ανάλογα με την περίπτωση, καθώς περαιτέρω δεδομένα διατίθενται από συνεχιζόμενες κλινικές δοκιμές και σύμφωνα με την ικανότητα της διαδικασίας παραγωγής (SO2)  Σημειώνεται ότι ο Αιτών δηλώνει ότι η δοκιμή βρίσκεται σε εξέλιξη για τις κλινικές παρτίδες και θα παρέχονται δεδομένα για αυτές τις παρτίδες, καθώς και τυχόν νέα διαθέσιμα δεδομένα για τις παρτίδες επικύρωσης πρωτογενούς διαδικασίας.  Με βάση τα δεδομένα περιορισμένης σταθερότητας που παρουσιάζονται, η διάρκεια ζωής έχει εγκριθεί για τη δραστική ουσία.  Τελικό προϊόν Το τελικό προϊόν είναι ένα συμπύκνωμα πολλαπλών δόσεων χωρίς συντηρητικά που πρέπει να αραιωθεί για ενδομυϊκή ένεση, που προορίζεται για 5 δόσεις.  Το τελικό προϊόν είναι μια αποστειρωμένη διασπορά νανοσωματιδίων λιπιδίων που περιέχουν RNA (LNPs) σε υδατικό ρυθμιστικό κρυοπροστατευτικού.  Οι μελέτες ανάπτυξης του σκευάσματος των RNA που περιέχουν νανοσωματίδια λιπιδίων έχουν περιγραφεί διεξοδικά, συμπεριλαμβανομένων μελετών που πραγματοποιήθηκαν με τη διαθέσιμη δραστική ουσία, αντιπροσωπευτική της πλατφόρμας mRNA και συμπεριλήφθηκαν στο τελικό προϊόν.  Η ανάπτυξη της διαδικασίας κατασκευής περιγράφεται εκτενώς και καθορίζονται κρίσιμες παράμετροι διεργασίας.  Η διαδικασία κατασκευής περιλαμβάνει την κατασκευή νανοσωματιδίων λιπιδίων και τη σύνθεση χύδην τελικού προϊόντος ακολουθούμενη από πλήρωση και φινίρισμα και η διαδικασία έχει περιγραφεί αποδεκτά.  Έκθεση αξιολόγησης EMA / 707383/2020 Page 34/140 Η συγκρισιμότητα μεταξύ του εμπορικού τελικού προϊόντος και του κλινικού τελικού προϊόντος έχει αποδειχθεί επαρκώς για τα χαρακτηριστικά που δοκιμάστηκαν και θα υπόκειται σε συγκεκριμένη υποχρέωση.  Παρουσιάστηκαν περιορισμένα δεδομένα για τις παρτίδες τελικού προϊόντος που κατασκευάστηκαν στην εμπορική εγκατάσταση (ολόκληρη η διαδικασία παραγωγής στον εμπορικό ιστότοπο Pfizer, Puurs, σε εμπορική κλίμακα, δραστική ουσία από τη διαδικασία 2).  Ένα σχέδιο επικύρωσης διαδικασίας για παρτίδες PPQ έχει παρασχεθεί.  Μια ταυτόχρονη προσέγγιση επικύρωσης θα χρησιμοποιηθεί λόγω της επείγουσας ανάγκης για αυτό το προϊόν και της πανδημικής κατάστασης.  Το σκεπτικό αυτής της προσέγγισης έχει τεκμηριωθεί.  Αυτή η ταυτόχρονη προσέγγιση απαιτεί την τεκμηρίωση των ενδιάμεσων αναφορών για κάθε μεμονωμένη εκτέλεση επικύρωσης.  Θα καταρτιστεί μια συνολική αναφορά ανά ιστότοπο που θα συνοψίζει όλες τις αξιολογήσεις και περιέχει μια αξιολόγηση συγκρισιμότητας των δεδομένων όλων των παρτίδων που έχουν κατασκευαστεί.  Τέλος, θα συνταχθεί μια τελική έκθεση που συνδέεται με αυτό το σχέδιο που συνοψίζει όλα τα ευρήματα από τις διάφορες εκθέσεις επικύρωσης.  Ζητήθηκαν περαιτέρω δεδομένα για να καταλήξει στο συμπέρασμα σχετικά με τη συνοχή της κατασκευής τελικών προϊόντων, για να εξασφαλιστεί η συγκρισιμότητα μεταξύ του εμπορικού προϊόντος με το προϊόν που χρησιμοποιείται σε κλινικές δοκιμές και για την υποστήριξη των απαιτούμενων συνθηκών αποθήκευσης και αποθήκευσης του τελικού προϊόντος.  Ένα σχέδιο επικύρωσης διαδικασίας για παρτίδες PPQ έχει παρασχεθεί.  Ξεκίνησε η επικύρωση της διαδικασίας (PPQ) για παρτίδες εμπορικής κλίμακας και δόθηκε συνοπτική έκθεση από μία παρτίδα επικύρωσης PPQ.  Συνοπτικά, δεδομένου ότι έχει θεσπιστεί ένα αποδεκτό πρόγραμμα επικύρωσης, το οποίο επίσης περιλαμβάνει την εμπορική εγκατάσταση στο Puurs του Βελγίου, και παρέχεται συνοπτική έκθεση από μία παρτίδα επικύρωσης PPQ, οι πληροφορίες σχετικά με την επικύρωση της διαδικασίας θεωρούνται αποδεκτές υπό την επιφύλαξη της συμφωνημένης ειδικής υποχρέωσης  ότι ο ΚΑΚ πρέπει να παρέχει πρόσθετα δεδομένα επικύρωσης (SO3).  Οι προδιαγραφές για το τελικό προϊόν περιλαμβάνουν μια ολοκληρωμένη ομάδα σχετικών δοκιμών μαζί με τα αντίστοιχα κριτήρια αποδοχής.  Προβλήθηκαν αρκετά ζητήματα σχετικά με τα κριτήρια αποδοχής στις προδιαγραφές του τελικού προϊόντος, δηλαδή το μέγεθος LNP, η πολυδιασπορά, η ενθυλάκωση RNA, η in-vitro έκφραση και η ακεραιότητα του RNA.  Ενώ οι προδιαγραφές FP τροποποιήθηκαν στη συνέχεια και βρέθηκαν γενικά αποδεκτές, τα όρια αποδοχής θα πρέπει να επανεκτιμηθούν και να αναθεωρηθούν ανάλογα, καθώς υπάρχουν διαθέσιμα περαιτέρω δεδομένα από τις τρέχουσες κλινικές δοκιμές και σύμφωνα με την ικανότητα διαδικασίας παραγωγής (SO2).  Δύο νέα έκδοχα περιλαμβάνονται στο LNP.  Δεν παρέχονται πλήρεις πληροφορίες τόσο για το κατιονικό λιπίδιο ALC-0315 όσο και για το ΡΕΟυλιωμένο λιπίδιο ALC-0159.  Προκειμένου να εξασφαλιστεί πλήρης έλεγχος καθ 'όλη τη διάρκεια του κύκλου ζωής του τελικού προϊόντος και να διασφαλιστεί η συνοχή μεταξύ παρτίδων, πρέπει να υποβληθούν περαιτέρω πληροφορίες σχετικά με τη συνθετική διαδικασία και τη στρατηγική ελέγχου σύμφωνα με συγκεκριμένες υποχρεώσεις (SO4, SO5).  Οι ακαθαρσίες που σχετίζονται με λιπίδια έχουν παρατηρηθεί σε ορισμένες παρτίδες τελικού προϊόντος που κατασκευάστηκαν πρόσφατα.  Για τις παρτίδες με ακαθαρσίες που σχετίζονται με λιπίδια, οι υπάρχουσες παράμετροι ποιοτικού ελέγχου συμπεριλαμβανομένης της ακεραιότητας του RNA παραμένουν αμετάβλητες.  Λαμβάνοντας υπόψη τα παραπάνω και την κατάσταση έκτακτης ανάγκης, ο χαρακτηρισμός της δραστικής ουσίας και του τελικού προϊόντος θεωρείται αποδεκτός και οι προτεινόμενες προδιαγραφές για το RNA Integrity και το 5'-Cap θεωρούνται επιστημονικά αιτιολογημένες και αποδεκτές.  Ωστόσο, πρόσθετα δεδομένα για την ολοκλήρωση του χαρακτηρισμού της δραστικής ουσίας και του τελικού προϊόντος και πρόσθετα κλινικά δεδομένα από παρτίδες που χρησιμοποιούνται επί του παρόντος σε τρέχουσες κλινικές μελέτες, θεωρούνται σημαντικά για την επιβεβαίωση του κλινικού χαρακτηρισμού αυτών των προδιαγραφών.  Ζητείται να παρέχονται αυτά τα δεδομένα ως ειδικές υποχρεώσεις για την ισχύουσα άδεια κυκλοφορίας υπό όρους (SO1, SO2).  Η αποτελεσματικότητα, η ασφάλεια και η ανοσογονικότητα αποδείχθηκαν χρησιμοποιώντας κλινικές παρτίδες εμβολίου από τη Διαδικασία 1. Οι εμπορικές παρτίδες παράγονται χρησιμοποιώντας διαφορετική διεργασία (Διαδικασία 2) και η συγκρισιμότητα αυτών των διεργασιών βασίζεται στην απόδειξη συγκρίσιμων βιολογικών, χημικών και φυσικών χαρακτηριστικών του ενεργού  ουσία και τελικό προϊόν.  Έκθεση αξιολόγησης EMA / 707383/2020 Page 35/140 Ο χαρακτηρισμός και ο έλεγχος της δραστικής ουσίας και του τελικού προϊόντος είναι περιορισμένοι σε σχέση με τα κρίσιμα χαρακτηριστικά ποιότητας και τις ακαθαρσίες.  Η καταλληλότητα των μεθόδων ανάλυσης που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο της ισχύος και της ουράς πολυ (Α) δεν έχει αποδειχθεί πλήρως.  Τα δεδομένα καταδεικνύουν την παρουσία σημαντικών ποσοτήτων κομμένων / τροποποιημένων μορφών mRNA σε κάπως υψηλότερα επίπεδα στις παρτίδες που κατασκευάζονται με την εμπορική διαδικασία σε σύγκριση με το υλικό που χρησιμοποιείται σε κλινικές δοκιμές.  Αυτές οι μορφές δεν χαρακτηρίζονται καλά, και τα περιορισμένα δεδομένα που παρέχονται για την έκφραση πρωτεΐνης δεν αντιμετωπίζουν πλήρως τις αβεβαιότητες που σχετίζονται με τον κίνδυνο μετάφρασης πρωτεϊνών / πεπτιδίων εκτός από την επιδιωκόμενη ακίδα πρωτεΐνης.  Η στρατηγική ελέγχου για τη δραστική ουσία και το τελικό προϊόν είναι σημαντική για να διασφαλιστεί η αποδεκτή ποιότητα και να εξασφαλιστεί η συνοχή μεταξύ των παρτίδων του τελικού προϊόντος.  Όσον αφορά την προτεινόμενη στρατηγική ελέγχου, τέθηκαν ερωτήματα τόσο όσον αφορά την καταλληλότητα των μεθόδων δοκιμής που χρησιμοποιήθηκαν όσο και τα κριτήρια αποδοχής για ορισμένες δοκιμές.  Με βάση τα παραπάνω, οι ακόλουθες αβεβαιότητες θεωρούνται σημαντικές για την εκτίμηση οφέλους-κινδύνου: • Περικομμένα και τροποποιημένα RNA υπάρχουν ως ακαθαρσίες.  Λαμβάνοντας υπόψη τη χαμηλή δόση mRNA (30 μg), οι ακαθαρσίες δεν θεωρούνται ζήτημα ασφαλείας βάσει γενικών τοξικολογικών αρχών.  Ωστόσο, όταν υπάρχει στο κύτταρο υπάρχει η πιθανότητα να εκφραστούν παρεκκλίνουσες πρωτεΐνες με πιθανότητες ανεπιθύμητων ανοσολογικών συμβάντων.  Ο κίνδυνος αυτού του συμβάντος θεωρείται χαμηλός με βάση τις ακόλουθες παρατηρήσεις και εκτιμήσεις: o Τέτοιες ακαθαρσίες υπήρχαν στο εμβόλιο που χρησιμοποιήθηκε στις κλινικές δοκιμές Φάσης 3 με αποδεκτό προφίλ ασφάλειας.  Αν και η έλλειψη χαρακτηρισμού εμποδίζει την πλήρη αξιολόγηση της συγκρισιμότητας, δεν υπάρχει ένδειξη ότι θα υπήρχαν σημαντικές ποιοτικές διαφορές στη φύση αυτών των ακαθαρσιών.  o Τα υψηλά επίπεδα αυτών των προσμείξεων αντικατοπτρίζουν την αστάθεια του RNA με αποτέλεσμα τη δημιουργία θραυσμάτων RNA τόσο στο στάδιο της μεταγραφής όσο και στη συνέχεια.  Με βάση τα ηλεκτροφορητικά δεδομένα φαίνεται ότι υπάρχει ένα διαφορετικό σύνολο θραυσμάτων. 

Αν και δεν επιβεβαιώνεται, είναι απίθανο αυτά τα μόρια RNA να είναι σε μεγάλο βαθμό μόρια mRNA με άθικτο 5'-cap και 3'-polyA.  o Το επίπεδο οποιουδήποτε μεμονωμένου παρεκκλίνοντος είδους mRNA θα ήταν με οποιονδήποτε τρόπο μεγέθη χαμηλότερο από το επίπεδο του ανέπαφου mRNA και αυτό θα αντικατοπτριζόταν από το επίπεδο έκφρασης πρωτεΐνης.  Η ποσότητα της πρωτεΐνης αναμένεται να είναι πολύ χαμηλή για να προκαλέσει ανοσοαπόκριση.  Η ακίδα πρωτεΐνης είναι μια εξαιρετικά ανοσογονική πρωτεΐνη και η ανοσοανεπάρκεια θα βεβαιώνει επίσης ότι η ανοσοαπόκριση στην παρεκκλίνουσα πρωτεΐνη θα είναι μη σημαντική.  • Προσμείξεις που σχετίζονται με λιπίδια παρατηρήθηκαν σε παρτίδες τελικού προϊόντος που παρήχθησαν πρόσφατα  Με βάση τη χαμηλή δόση (30 μg mRNA) θεωρείται ότι οι ποσότητες αυτών των προσμείξεων είναι πολύ χαμηλές για να είναι τοξικολογικής σημασίας.  (σελ.32-37)

 Μηχανισμός δράσης
Το SARS-CoV-2 μολύνει το σώμα με τη χρήση της πρωτεΐνης Spike (S) για προσκόλληση σε συγκεκριμένους υποδοχείς κυτταρικής επιφάνειας, από τους οποίους το ένζυμο μετατροπής της αγγειοτενσίνης 2 (ACE2) μπορεί να αποτελεί σημαντικό μέρος, όπως προτάθηκε πρόσφατα.  Εκτός από την αρχική προσκόλληση σε ένα κύτταρο ξενιστή, η πρωτεΐνη S είναι επίσης υπεύθυνη για τη σύντηξη του ιικού περιβλήματος με τη μεμβράνη του κυττάρου ξενιστή με αποτέλεσμα την απελευθέρωση του γονιδιώματος.  Λόγω του απαραίτητου ρόλου της, η πρωτεΐνη S είναι ένας κύριος στόχος αντισωμάτων εξουδετέρωσης ιών και έχει γίνει βασικό αντιγόνο για την ανάπτυξη εμβολίων.  Με ανοσοποίηση με το τροποποιημένο RNA (modRNA) προϊόν BNT162b2, που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη S, η πρόθεση είναι να προκαλέσει μια ισχυρή και σχετικά μακροχρόνια παραγωγή αντισωμάτων εξουδετέρωσης ιών υψηλής συγγένειας, τα οποία μπορούν να δράσουν μπλοκάροντας την πρωτεΐνη S και τον υποδοχέα της  -σύνδεση τομέα δέσμευσης (RBD) με υποδοχείς κυττάρων ξενιστών αλλά επίσης και με εκκαθάριση ιού που προκαλείται από οψονισμό.  Επιπλέον, η ανοσοποίηση με BNT162b2 προορίζεται επίσης να προκαλέσει ταυτόχρονη απόκριση Τ κυττάρου τύπου Th1, υποστηρίζοντας τα Β κύτταρα που είναι υπεύθυνα για την παραγωγή ειδικών αντισωμάτων και κυτταροτοξικών Τ κυττάρων που σκοτώνουν μολυσμένα από ιό κύτταρα.  Έκθεση αξιολόγησης EMA / 707383/2020 Page 42/140 Η πρωτεΐνη S είναι μια τριμερή πρωτεΐνη σύντηξης κατηγορίας Ι που υπάρχει σε μια μεταστατική διαμόρφωση προτίμησης πριν εμπλακεί με ένα κύτταρο στόχο.  Το BNT162b2 κωδικοποιεί μια παραλλαγή P2 μεταλλάκτη (P2S) του S όπου έχουν εισαχθεί δύο διαδοχικές μεταλλάξεις προλίνης προκειμένου να κλειδώσει το RBD στη διαμόρφωση προτίμησης.  Επιπλέον, το BNT162b2 τροποποιείται με νουκλεοζίτη με αντικατάσταση της 1-μεθυλψευουριδίνης για την ουριδίνη και συνεπώς η εγγενής επικουρική του δράση μεσολαβούμενη από δέσμευση σε έμφυτους ανοσοαισθητήρες όπως υποδοχείς τύπου toll (TLRs) 7 και 8, είναι υγραμένος, αλλά δεν ακυρώνεται.  Επιπλέον, τα δομικά στοιχεία των φορέων κορμού του ΒΝΤ162b2 βελτιστοποιούνται για παρατεταμένη και ισχυρή μετάφραση του RNA που κωδικοποιεί αντιγόνο.  Η ισχύς του εμβολίου RNA βελτιστοποιείται περαιτέρω με ενθυλάκωση του RNA σε νανοσωματίδια λιπιδίων (LNPs), τα οποία προστατεύουν το RNA από την αποικοδόμηση με RNAses και επιτρέπουν την επιμόλυνση κυττάρων ξενιστών μετά από ενδομυϊκή (ενδομυϊκή) παράδοση.  Το λειτουργικό και ιονιζόμενο λιπίδιο, ALC-0315, αναγνωρίζεται ως ο πρωταρχικός παράγοντας παράδοσης καθώς επιτρέπει στα LNP να έχουν ουδέτερο φορτίο σε ένα φυσιολογικό περιβάλλον για να διευκολύνουν την εσωτερίκευση.  το ενδοσωμικό περιβάλλον παρουσιάζει θετικό φορτίο και επομένως ενεργοποιεί τη μετατόπιση του RNA στο κυτοσόλιο (Midoux & Pichon, 2015; Hassett et al, 2019; Patel et al, 2019);  Το ALC-0159 περιλαμβάνεται στο σκεύασμα για να παρέχει ένα στερικό φράγμα για: 1) να διευκολύνει τον έλεγχο του μεγέθους των σωματιδίων και της ομοιογένειας κατά την κατασκευή και την αποθήκευση προϊόντος, και 2) να ρυθμίζει τη σύνδεση πλάσματος και πρωτεϊνών με την επιφάνεια LNP.  Η σύνθεση των LNPs μπορεί επίσης να επηρεάσει την κατανομή του ενέσιμου BNT162b2.  Επιπλέον, δεν μπορεί να αποκλειστεί η σύνθεση LNP που συμβάλλει στη συνολική ανοσογονικότητα.  Η χορήγηση εμβολίων RNA που έχουν διαμορφωθεί με LNP ​​οδηγεί σε παροδική τοπική φλεγμονή που οδηγεί στην πρόσληψη ουδετερόφιλων και κυττάρων που παρουσιάζουν αντιγόνα (APCs) στη θέση της παράδοσης.  Οι προσληφθέντες APC είναι ικανοί για πρόσληψη LNP και έκφραση πρωτεΐνης και μπορούν στη συνέχεια να μεταναστεύσουν στους τοπικούς λεμφαδένες αποστράγγισης όπου εμφανίζεται η εκκίνηση Τ κυττάρων.  Γενικά, μετά την ενδοκύτωση των LNPs, το mRNA απελευθερώνεται από το ενδοσώμα στο κυτταρικό κύτταρο ξενιστή (Sahay et al, 2010; Maruggi et al, 2019). 
Η διαδικασία ανοσοαπόκρισης που προκαλείται από εμβόλιο RNA έχει αποδειχθεί τόσο σε ποντίκια όσο και σε μη ανθρώπινα πρωτεύοντα μοντέλα (Pardi et al, 2015; Liang et al, 2017) (σελ.41-42)

 Γονιδιοτοξικότητα Δεν έχουν δοθεί μελέτες γονοτοξικότητας.  Αυτό είναι αποδεκτό καθώς τα συστατικά του σκευάσματος εμβολίου είναι λιπίδια και RNA που δεν αναμένεται να έχουν γονιδιοτοξικό δυναμικό (σελ.50)


  2.3.4.  Αξιολόγηση οικοτοξικότητας / περιβαλλοντικού κινδύνου Δεδομένου ότι η δραστική ουσία είναι προϊόν εμβολίου (το οποίο βασίζεται επιπλέον σε φυσικά αποικοδομήσιμο mRNA και λιπίδια), δεν θεωρείται απαραίτητος ERA (σελ.51


Δεν υπάρχουν σχόλια:

Δημοσίευση σχολίου

Σημείωση: Μόνο ένα μέλος αυτού του ιστολογίου μπορεί να αναρτήσει σχόλιο.